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    平滑肌細胞的分離和培養

    發布時間: 2022-12-09  點擊次數: 631次

    料與儀器

    0.25%胰蛋白酶和EDTA混合液
    平滑肌培養液
    Petri培養皿 手術刀和10號手術刀片 解剖剪 組織鑷

    步驟

    1. 從小牛取胸主動脈。

    2. 將胸主動脈浸入 Hanks 液。

    3. 分離細胞之前將動脈放在冰上。

    4. 將動脈放入 150 mm × 25 mm Petri 培養皿。

    5. 用解剖剪沿長軸剪開動脈。

    6. 用手術刀片輕刮動脈內腔面,以除去內皮細胞。

    7. 將動脈的中膜與內膜和外膜分離。

    8. 將中膜切成約 1 cm2 大小的組織塊。

    9. 將中膜組織塊放入 60 mm × 15 mm Petri 培養皿,內膜側朝下。

    10. 讓組織塊貼壁約 10 min。

    11. 直接在組織塊上注 1 ml SMCM(平滑肌培養液(smooth muscle cell medium,SMCM):DMEM 添加 20 % FBS,100 U/ml 青霉素和 100 μg/ml 鏈霉素)。

    12. 將組織塊放入濕潤的培養箱,在 37°C 和 10% CO2 條件下孵育。

    13. 第 2 天加入 5 ml SMCM,注意勿讓組織塊去附著。

    14. 將組織塊繼續孵育 10 d。此后,平滑肌細胞從組織塊遷移出來,并變為單層。

    15. 細胞生長接近形成單層時,用 0.25 % 胰蛋白酶和 EDTA 混合液傳代。


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