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    Nunc細胞工廠

    發布時間: 2023-01-11  點擊次數: 540次

    原理

    用培養液制備細胞懸液,將懸液注入單元的各小室內。使長邊朝下,放置。將單元旋轉 90度,放平后用 CO2 充氣。然后封閉,進行培養。

    材料與儀器

    單層細胞 0.25%天然胰蛋白酶 D-PBSA
    生長培養液
    Nunc細胞工廠 硅酮管和連接器 血細胞計數板或電子細胞計數器和計數用液體

    步驟

    1. 用胰蛋白酶消化后,將細胞懸浮,計數細胞,用 2 L 培養液將懸液稀釋至細胞密度為 2x104 個/ml。

    2. 使小室長邊朝下,放置,將培養液供應管與 Luer 連接管相接,再通過供應管與底孔連通。

    3. 經供應管加入細胞和培養液。所有培養小室內的液體將達到相同水平。

    4. 按單層細胞平面將小室轉動 90度,使單元的短邊朝下,放置,使進孔和供應管朝上。

    5. 在 Luer 連接管處,中斷供應管與培養液儲存器的連接。

    6. 與細胞單層平面垂直,將培養小室轉動 90度,以底部放平,使培養面呈水平位。

    7. 用 5% CO2 空氣向單元充氣 5 min,然后夾住供應管和出口。如果需要,可連續充氣。

    8. 倒掉供應管和出口內的培養液,然后將單元移入培養箱。

    9. 更換培養液(或收集培養液)時,按步驟 6 的相反程序操作。除去輸入管上的濾器,然后按步驟 4 相反程序操作。

    10. 擦洗 Luer 連接管,松開夾具,使培養液流出。

    11. 按步驟 2~8 更換培養液。

    12. 收集細胞。

    (a)按步驟 9 和步驟 10 除去培養液。

    (b)加入 500 ml D-PBSA,然后除去。

    (c)加入 4℃的 500 ml 胰蛋白酶,30 s 后除去。

    (d)用剩余的胰蛋白酶將細胞消化 15 min。

    (e)加入培養液,搖動培養小室,使細胞懸浮。

    (f)按步驟 9 和步驟 10 取出含細胞的培養液。

    13. 殘留細胞可用于接種下一批細胞,雖然這種方法難以控制接種密度。最好是將培養小室丟棄,用新的小室重新開始培養。


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